2025/10/14 by Mohsen Vaez, Vaez, Mohsen, Nazanin Kazeminejad +1
Engineering · Materials Science · Medicine · #Advanced Nanomaterials in Catalysis #Biosensors and Analytical Detection #COVID-19 #Colorimetric assay. #RNA viruses #Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) #SARS-CoV-2 #SARS-CoV-2 detection and testing
paper · doi:10.82363/jmw.2025.1229433
openalex publication_date 2025/10/14 · openalex created_date 2025/12/27 · openalex updated_date 2026/07/07
سابقه و هدف : تکامل و شیوع سویههای جدید و در حال ظهور کروناویروس حاد و شدید تنفسی 2 (SARS-CoV-2) عامل بیماری کووید-19 هنوز یک چالش بهداشتی محسوب میشود و روشهای مولکولی کمک کننده هستند. اين پژوهش با هدف راهاندازی یک روش ساده و سریع رنگسنجی واکنش تكثير همدما بواسطه حلقه با رونويسي معكوس (RT-LAMP) کروناویروس انجام شد. مواد و روش ها: اين پژوهش به صورت تجربی بر روی دو RNA مصنوعی رونوشت برداری شده از دو سازه ژنی مورد مطالعه قبلی ما و یک RNA جدید سنتز شده از ژن نوکلئوکپسید SARS-CoV-2 تهیه شده از واریانت XFG انجام شد. در ابتدا اقدام به تهیه RNA سنتزی به عنوان ژن هدف برای راه اندازی واکنش RT-LAMP گردید. پس از بهینه سازی واکنش از معرف رنگی هیدروکسی نفتل بلو استفاده و روش رنگسنجی راهاندازی شد. همچنین واکنش رنگی RT-LAMP بر روی ژن سنتزی واریانت XFG با موفقیت انجام گردید. از واکنش Real-time PCR نیز بر روی نمونه هاي RNA سنتز شده به منظور تایید نتایج استفاده گردید. یافته ها: روش رنگسنجی RT-LAMP با موفقیت برای تشخیص نمونههای سنتزی SARS-CoV-2 راهاندازی و بهینه گردید. زمان لازم برای انجام واکنش 40 دقیقه با حد تشخیص 75 نسخه ژن هدف در واکنش تعیین گردید. نتیجه گیری: بکارگیری روش رنگ سنجی مرئی با حضور رنگ HNB در حین واکنش RT-LAMP روشی ساده و سریعتر از بکارگیری رنگهای فلورسانت معمول همچون سایبرگلد و سایبرگرین است و ضمن حذف زمان آشکارسازی نتایج از ایجاد آلودگی پس از پایان واکنش جلوگیری و از تولید نتیجه مثبت کاذب میکاهد.